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siRNA专用转染试剂

Braveds
概述

是一款新型、性能稳定的siRNA专用转染 试剂,它具有较强的压缩RNA的能力,能够把RNA高效率、迅速地转 染到真核细胞之中,而不被核酸酶降解。与其他转染试剂相比,具有 毒性低、稳定性好、耐血清能力强、转染简单易行、重复性好等优点。

剂可适用于众多原代培养和转化细 胞株的siRNA转染。沉默效率高且性能稳定,在有无血清存在的细胞 培养基中均能获得非常理想的基因沉默效果。

 siRNA的转染:

以24孔板为例,步骤如下:

1.细胞接种: 每孔接种0.5~1.0×105个细胞,细胞培养 12~24小时,使转染时细胞密度达到60~70%融合度

2.siRNA稀释: 将15pmol的siRNA加入Opti-MEM培养基中, 稀释后的终体积为10µL

3.转染试剂稀释: 取1μL的siRNA专用转染试剂加入到9μL的 Opti-MEM培养基中,稀释后的终体积为10µL

4.复合物制备:将上述siRNA稀释液和转染试剂稀释液混合, 轻轻吹打均匀后,室温静置10分钟

5.将上述20µL复合物加入到24孔板中,轻轻吹打混匀,继 续培养18~48小时后检测转染效率,无需更换培养基

siRNA转染的优化:

可通过改变细胞密度、 siRNA浓度以及siRNA专用转染试剂浓度对转染进 行 优 化 。 保 证 细 胞 融 合 度 在 60% 以 上 , siRNA专用转染试剂(µL): siRNA(pmol)可以在0.02:1和0.15:1之间调整。

 

不同培养板所需转染试剂和siRNA的用量

培养板

单孔面积

接种培养基

Opti-MEM稀 释后终体积

siRNA转染

试剂用量

siRNA

96孔板

0.3cm2

200ul

10ul

0.5ul

7.5pmol

24孔板

2.0cm2

500ul

20ul

1.0ul

15pmol

12孔板

4.0cm2

1ml

40ul

2.0ul

30pmol

6孔板

10.0cm2

2ml

100ul

4.0ul

60pmol

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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