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悬浮细胞专用转染试剂

Braveds
概述

是一款专用于悬浮细胞转染的DNA转染 试剂,可用于质粒DNA在悬浮生长细胞中的传送。它适用于大规模蛋 白生产,及工业化生产中的真核细胞转染。具有不受血清影响、毒性 低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。

适用于293F和CHO-S等悬浮 细胞的转染。在有血清和无血清的条件下,均可得到较高的转染效率, 且重复性好。在大规模蛋白生产中,操作简单、蛋白表达量高、细胞 毒性低、细胞通用性好。

质粒DNA的转染:

以100mL培养瓶为例,步骤如下: 

1.细胞接种: 0.2~0.5×106/mL个细胞,接种于20mL培养基 中,在37℃,120rpm,5%CO2 的条件下培养

2.质粒DNA稀释: 将10µg质粒DNA加入Opti-MEM培养基 中,稀释后的终体积为50µL

3.转染试剂稀释: 取20μL的悬浮细胞专用转染试剂加入到30μL的 Opti-MEM培养基中,稀释后的终体积为50µL

4.复合物制备:将上述质粒DNA稀释液和转染试剂稀释液 混合,轻轻吹打均匀后,室温静置10分钟

5.将上述100µL复合物加入到细胞培养瓶中,继续摇动培养 培养18~48小时后检测转染效率,无需更换培养基

质粒DNA的转染优化:

可通过改变细胞密度、DNA浓度以及悬浮细胞专用转染试剂浓度对转染 进行优化。悬浮细胞专用转染试剂 (µL): DNA (µg)可以在1:1和5:1之间调整。 转染大于48h后,可通过适量添加培养基的方式延长转染时间。 

 

不同培养瓶所需转染试剂和DNA的用量

培养瓶

细胞数量

接种培养基

Opti-MEM稀 释后终体积

DNA转染

试剂用量

DNA

50mL

0.5×106/mL

10mL

50ul

10ul

5ug

100mL

0.5×106/mL

20mL

100ul

20ul

10ug

250mL

0.5×106/mL

50mL

200ul

50ul

25ug

500mL

0.5×106/mL

100mL

400ul

100ul

50ug

1L

0.5×106/mL

200mL

2ml

200ul

100ug

5L

0.5×106/mL

1L

4ml

1ml

500ug

 

 

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