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体内专用转染试剂

Braveds
概述

是一款体内专用型基因转染试剂,可通 过尾静脉注射的方式将基因传送至肿瘤部位。与其它体内转染试剂相 比,具有操作简便、体内毒性低、稳定性好、体内循环时间长、靶向 性好等优点。

可适用于众多动物肿瘤模型。 可携带荧光标记基因、治疗基因等到达肿瘤部位,并在肿瘤部位蓄积 和表达。特别适用于各种常规肿瘤模型如HeLa、B16F10、MCF-7、 MDA-MB-231和A549等,均可得到较高的转染效率,且重复性好。

体内转染方法:

以体重为20g的荷瘤鼠为例,步骤如下:

1.试剂准备: 首先取20µL 体内专用转染试剂放置于样品管中

2.复合物制备: 取40µL的质粒DNA(DNA浓度为0.5µg/µL) 或siRNA(1.5nmol)与上述转染试剂进行复合

3.室温静置20分钟

4.补加葡萄糖注射液: 取140µL的葡萄糖注射液加入到上述 复合物溶液中

5.通过尾静脉注射的方式,注射于鼠体内,24~48小时后检 测基因在肿瘤部位的蓄积或表达

体内转染条件的优化:

可 通 过 改 变 肿 瘤 体 积 的 大 小 、 基 因 的 用 量 和 浓 度 以 及 体内专用转染试剂浓度对体内转染进行优化。保证肿瘤体积在 50mm3~200mm3最佳,体内专用转染试剂(µL): DNA(µg)可以在 2:1和0.5:1之间调整;体内专用转染试剂(µL): siRNA(nmol)可以在 10:1和20:1之间调整。根据小鼠体重的不同,葡萄糖注射液的补加体 积可以在推荐量±30µL之间调节。瘤内基因蓄积建议在注射后24小时 检测,瘤内基因表达建议在注射后48小时检测。

 

不同体重鼠的体内转染用量

鼠体重

建议瘤体积

葡萄糖注射液稀释后终体积

DNA推荐用量

siRNA推荐用量

试剂用量

mRNA

试剂用量

siRNA

15g

100mm3

150ul

15ul

15ug

15ul

1.2nmol

20g

100mm3

200ul

20ul

20ug

20ul

1.5nmol

25g

100mm3

250ul

25ul

25ug

25ul

2.0nmol

30g

100mm3

300ul

30ul

30ug

30ul

2.4nmol

 

 

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